Tris-Puffer ist ein häufig verwendeter pH-Puffer, der häufig in biochemischen Experimenten verwendet wird. Bei PCR-Reaktionen hemmt Tris-Puffer die DNase-Aktivität und sorgt zusätzlich für die Aufrechterhaltung der pH-Stabilität. Sein Wirkungsmechanismus manifestiert sich hauptsächlich in folgenden Aspekten:
1. Ändern Sie die aktive Konformation von DNase: Das Kation im Tris-Puffer kann an das aktive Zentrum von DNase binden, seine Konformation ändern und dadurch seine Aktivität verringern. Diese Wirkungsweise hemmt die Aktivität der in der Umgebung vorhandenen Nukleasen und schützt so die DNA-Matrize vor dem Abbau.
2. Kompetitive Hemmung: Die Kationen in Tris können mit dem aktiven Zentrum der DNase kompetitiv an die DNA-Matrize binden, wodurch die Bindung der DNase an die Matrize verhindert und ihre Abbauaktivität verringert wird. Diese kompetitive Hemmung kann die durch Verunreinigungen im Reaktionssystem verursachte DNase-Aktivität verringern.
3. Erhöhen Sie die Reaktionstemperatur: Tris-Puffer weist eine gute Stabilität bei hohen Temperaturen auf und kann daher die Temperatur der PCR-Reaktion erhöhen. Hohe Temperaturen können die Aktivität von DNase weiter hemmen und die Amplifikationseffizienz der DNA-Polymerase verbessern. Durch die Kombination hoher Temperaturen mit Tris-Puffer können die Auswirkungen von DNase eliminiert und ein reineres PCR-Produkt erhalten werden.
